厭氧菌及棒狀桿菌鑒定卡由20個具干燥底物的小管組成,可用于測定酶活性和糖的發(fā)酵。酶活性測定將濃的菌懸液接種于干燥的酶底物,使其復(fù)溶。孵育過程中,所產(chǎn)生的代謝終產(chǎn)物通過自然反應(yīng)或加入附加試劑而變色。發(fā)酵試驗將菌懸液接種于營養(yǎng)培養(yǎng)基中(含pH指示劑),使管內(nèi)底物溶解。糖發(fā)酵結(jié)果由pH 指示劑的變化而測得。鑒定結(jié)果可根據(jù)說明書的判讀表進(jìn)行讀出,也可參照生化譜檢索手冊或測定軟件,得到鑒定結(jié)果。
厭氧菌及棒狀桿菌鑒定卡程序性步驟:
1.菌落的選取,一旦要鑒定的菌株被分離并被證實為革蘭氏陽性、無芽孢形成、兼性需氧-厭氧桿菌桿菌:
1.1 記錄溶血類型
1.2 挑取一個分離較好菌落于0.3ml 的無菌水中制備均勻菌懸液。
1.3 用該懸液注入瓊脂平板中【Trypcase Soy 瓊脂+5%羊血平板或哥倫比亞瓊脂(加或不加CAN)+5%羊血平板上】(或用拭子涂布整個平板表面)。
1.4 37°C 孵育24 – 48 小時
2.試條的準(zhǔn)備
2.1 準(zhǔn)備一個培養(yǎng)盒(盤和蓋子),倒入約5ml 蒸餾水或去離子水【或任何不含添加劑或不含能產(chǎn)生揮發(fā)性氣體(如Cl2,CO2 等)的化學(xué)物質(zhì)的水】于盤的蜂窩小凹中,造成一個濕室。
2.2 記錄菌株資料于盤的長邊上(不記在蓋上,因為操作過程中很容易將蓋子放到其它試條上)。
2.3 從包裝袋中取出試條。
2.4 置試條于培養(yǎng)盒中。
3.接種物的制備
3.1 按產(chǎn)品說明書中“警告和注意”所示,打開API 懸浮培養(yǎng)基安瓿。
3.2 用拭子收集所有先前準(zhǔn)備好的傳代平板上的細(xì)菌。建議使用培養(yǎng)24-48 小時的新鮮菌。
3.3 制備菌懸液,濃度為6 個麥?zhǔn)蠁挝弧>鷳乙褐苽浜煤髴?yīng)立即使用。